本发明涉及植物**培养技术领域，尤其是涉及一种绣球的液体培养基组培快繁方法。背景技术：绣球(hydrangeamacrophylla)为虎耳草科绣球属落叶灌木,别名八仙花、**花、粉团花、雪球花、草绣球等，是园林上应用***的观赏植物。原产于我国长江流域及以南，自然株高2m。叶对生，倒卵或椭圆形，边缘有锯齿，伞房花序顶生，直径20cm，近球形。花色多变，青白色，渐转粉红色，再转紫红色，花色美艳。其花色又常随土壤的酸碱度而改变,土壤ph值4～6时，花色多呈蓝色；ph值，则呈红色。绣球花叶片翠绿，花色鲜艳，盛开时花团锦簇，美丽多姿，每簇花可开2个月之久，观赏期长。由于绣球花的孕性花极为少数，所以不易结种，常用分株、压条或扦插方法繁殖，但分株、压条繁殖倍率低，速度慢，而扦插繁殖又会受到季节的限制，不能常年生产苗木，很难满足市场的需求。技术实现要素：针对现有技术存在的不足，本发明的目的之一是提供一种繁殖周期短，效率高，成本低的绣球的液体培养基组培快繁方法。本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：一种绣球的液体培养基组培快繁方法，具体步骤如下：s1：外植体选择；s2：外植体消毒；s3：诱导培养；s4：增殖培养；s5：生根培养，其中。无酚红培养基在敏感细胞系的培养中表现优越。西藏基础培养基常用知识
本发明涉及植物**培养技术领域，特别涉及一种植物**培养基。背景技术：ms培养基于1962年由murashige和skoog设计，是目前植物**培养中应用**为***的培养基。据《危险化学品安全管理条例》(***令第591号)、《民用物品安全管理条例》及《易制爆危险化学品名录》(2017年版)可知，ms培养基的主要成分硝酸钾、硝酸铵均为易制爆管制试剂，随着**监管越发严格，所有易制爆试剂的购买、储存及使用变得越来越困难，尤其是兼有硝态氮和铵态氮的硝酸铵，其纯品被禁止市场流通，为植物**培养带来很大难度。b5培养基于1968年由gamborg等为培养大豆根细胞而设计，n6培养基于1974年由朱至清等为水稻等禾谷类作物花*培养而设计，两者均由ms培养基衍生而来，在有些植物**培养研究中***应用，虽然b5和n6培养基除了硝酸钾外不含其他易制爆成分，但两者中的钙离子和镁离子含量均大幅降低，且b5培养基中铵离子大幅减少、n6培养基中钾离子大幅增加，这些离子浓度的大幅波动对一些植物的**培养是不利的。cna草莓增殖培养基公开了一种无硝酸铵培养基，但其硝酸钾及**铵含量过高，*适用于草莓**培养；cna一种草莓**培养基及其配制方法公开了一种无硝酸铵培养基，在草莓**培养中取得很好的效果。宁夏基础培养基进口无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验设置。
体外动物细胞培养时需要大量谷氨酰胺，利用量常超过其他必须氨基酸利用量的总和。维生素是维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。维生素可分为水溶性和脂溶性两类，水溶性维生素主要包括泛酸、维生素B12、叶酸、烟酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黄素、维生素C、胆碱、肌醇等；脂溶性维生素主要包括维生素A、D、E、K等；有的培养液中还直接采用ATP和辅酶A；大部分培养基中还有生物素。许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分，没有它们，酶便没有活性，代谢活动将无法进行。比如，泛酸可以在细胞内转变成酰基载体蛋白和辅酶（如辅酶A），参与糖类、脂类和蛋白质代谢中的催化反应；维生素B12则在细胞内参与叶酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的细胞培养基中维生素的浓度有较大差异。例如，DMEM培养基中维生素的含量约为MEM培养基的两倍，其原因是一方面不同种类维生素的作用不同，另一方面不同种类的细胞对维生素的需求也可能有较大差异，相应细胞培养基的配方中维生素的含量也可能不同。无机盐是细胞维持生命活动所不可缺少的营养成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43—、SO42—、HCO3－等，主要作用为维持细胞培养液渗透压平衡。
此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种：一种为℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般**繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气**器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后**繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。(4)间歇**法（fractionalsterilization）。采用间歇方式达到**目的。将**物品置于阿诺流通蒸气**器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气**器加热而被杀灭。如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的**属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气**器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。通常在℃。减血清培养基减少了血清成分的变异性。
愈伤**诱导率为100％。如图6所示。对比培养例6：将cs基本培养基替换为ms基本培养基，其余完全同培养实例6，ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为：本氏***叶片愈伤**诱导时，培养15-18d的叶片略微增厚，在叶片四周产生较少的淡绿色愈伤**，愈伤**诱导率为90％，在愈伤**团块上产生的嫩绿色不定芽数量较少；本氏***根愈伤**诱导时，培养9-11d在切口处产生大量淡黄色致密的愈伤**，愈伤**诱导率为100％。如图6所示。培养实例6和对比培养例6的诱导结果比较：用上述方法进行本氏***叶片愈伤**诱导时，cs诱导培养基愈伤**诱导率为100％，而ms诱导培养基的诱导率*为90％，在所述相同培养条件下，与ms诱导培养基相比，cs诱导培养基可更快诱导出大量致密的叶片愈伤**、产生更多的不定芽；用上述方法进行本氏***根愈伤**诱导时，cs诱导培养基与ms诱导培养基诱导出的根愈伤**形态相近，两种培养基的根愈伤**诱导率均为100％。如图6所示。培养实例7：水稻成熟胚愈伤**诱导(1)水稻种子消毒及筛选：a、选种：以籼稻缙恢10号为例，将水稻种子晾晒干燥后于4℃下长期保存，挑选籽粒饱满、大小基本一致的水稻种子，用剪刀从种子中部剪开，去除谷壳。无酚红培养基在细胞实验中减少了不必要的干扰。西藏基础培养基常用知识
F12培养基能够支持细胞的持续分裂。西藏基础培养基常用知识
4、本发明植物**培养基，其不含碘化钾，在绝大多数植物中，碘元素不是必需元素，实验发现去除碘化钾对植物**培养没有影响，并且植物在脱离培养基进行后期培养时仍可以从土壤等基质中富集碘元素，去掉碘化钾成分，也简化了培养基配制过程。5、本发明植物**培养基，其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o，该替换减少的**根离子通过适当增加**铵成分来补充，该替换主要基于两个特征，一方面，nafeedta是可溶性螯合铁，更容易被植物吸收，有利于植物叶绿体发育，另一方面，发明人发现，na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等众多植物**培养基原始ph偏低及ph波动大的主要原因，本发明培养基中使用nafeedta之后，经ph为，而植物**适宜生长的ph一般为，因此，使用nafeedta既促进了植物对铁离子的吸收，又有利于培养基ph的稳定。6、本发明植物**培养基，其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量，增加了cuso4·5h2o、烟酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇的用量，该改变特征在于，有效减少愈伤**玻璃化发生，减少酚类物质产生，提高愈伤**的出愈率，实验发现，优化后的培养基出愈时间提前，对多种植物的愈伤**诱导是有益的。西藏基础培养基常用知识
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